TriniCLOT Aptt S

TriniCLOT Aptt S

APLICACION

TriniCLOT aPTT S es un equipo de prueba que se utiliza en la determinación del Tiempo de Tromboplastina Parcial Activado (TTPA), y que consiste en un reactivo fosfolípido con activador en partículas y un reactivo de cloruro de calcio.

RESUMEN Y PRINCIPIO

La prueba de Tiempo de Tromboplastina Parcial Activado (TTPA) es un procedimiento de screening universalmente aceptado que se utiliza para detectar anomalías en el sistema intrínseco de coagulación. Puede utilizarse también en pruebas de factores para detectar deficiencias de los Factores II, V, VIII, IX, X, XI y XII, pero es insensible al Factor plaquetario 3.

Además puede utilizarse para detectar el anticoagulante de Lupus6 y se recomienda para controlar la terapéutica con heparina, ya que es sensible a la presencia de ésta. La prueba de TTPA no se recomienda para controlar la terapéutica anticoagulante oral ni es sensible a la disfunción plaquetaria. Estas condiciones se controlan mejor mediante una prueba de tiempo de protrombina o una prueba de tiempo de sangría, respectivamente. 

Reactivo TriniCLOT aPTT S se mezcla con plasma del paciente para proporcionar una activación uniforme óptima de la muestra. Después de la activación a 37°C durante cinco minutos, se inicia la reacción añadiendo CaCl2 TriniCLOT aPTT S. Se mide, en segundos, el tiempo necesario para la formación de coagulación.

REACTIVO

Para diagnóstico in vitro.

DESCRIPCIÓN DEL REACTIVO

TriniCLOT aPTT S Reagent, 5 x 10 ml, T1201A

TriniCLOT aPTT S Reagent, 5 x 3 ml, T1202A

Fosfolípidos purificados (porcino y pollo); contiene sílice micronizado (activador), tampón, estabilizador, y un 0,02% de azida sódica como conservante.

TriniCLOT aPTT S CaCl2 (0.02 M), 5 x 10 ml, T1201B

TriniCLOT aPTT S CaCl2 (0.02 M), 5 x 3 ml, T1202B

Contiene tampón, estabilizador, y un 0,05% de azida sódica como conservante.

PREPARACIÓN DEL REACTIVO

Durante la conservación puede tener lugar alguna sedimentación del activador, por lo tanto, invertir suavemente el Reactivo TriniCLOT aPTT S varias veces antes de su uso para asegurar la homogeneidad. Durante el uso no es preciso agitar continuamente.

Atención: Ambos componentes de este equipo contienen azida sódica (NaN3) como conservante. Al desecharlos en la cañería, háganse circular un volumen considerable de agua a fin de evitar la formación de azidas metálicas. Cuando éstas se concentran en las cañerías de plomo, pueden ser potencialmente explosivas.

MATERIALES ADICIONALES NECESARIOS

·         Micropipeta con puntas desechables, 0,1 ml

·         Plasmas de control

·         Plasma de Referencia y Plasma Deficiente en Factor (para pruebas de factores)

·         Instrumentación para coagulación

MATERIALES DISPONIBLES

• Plasmas Deficientes en Factores

• Instrumentación para coagulación

• TriniCHECK Control Plasmas

• TriniCAL Reference Plasma

INSTRUMENTOS

Existen adaptadores de método/aplicaciones para analizadores específicos bajo petición. Para solicitar uno, póngase en contacto con su comercial local.

ALMACENAJE Y ESTABILIDAD

Conservar todos los componentes del equipo TriniCLOT aPTT S a 2-8°C cuando no se utilicen.

No congelar. La fecha de caducidad impresa en el vial indica la fecha tras la cual no se puede utilizar el componente. Signos de deterioro se reflejan en los resultados del control de calidad fuera de los márgenes establecidos para laboratorios.

Los estudios realizados con Reactivo TriniCLOT aPTT S y CaCl2 TriniCLOT aPTT S indican que el reactivo abierto permanece estable durante el período de tiempo indicado en la tabla siguiente si se mantiene en el vial hermético original y se utiliza según las prácticas estándar de laboratorio. Aunque cada laboratorio debería establecer sus propios límites de tiempo basándose en los instrumentos, el medio y las condiciones de conservación, dichos límites no deben superar los límites encontrados válidos en condiciones controladas.

Temperatura de conservación     Estabilidad

2-8°C                                                 30 días

20-25°C                                             3 días

37°C                                                  8 horas

OBTENCIÓN Y ALMACENAJE DE MUESTRAS

Se deben obtener nueve volúmenes de sangre en un volumen de citrato de sodio al 3,2% (0,109 M).

Inmediatamente después de obtener las muestras de sangre, las muestras se centrifugan a 1 500 x g durante 15 minutos. Consulte la versión más reciente del documento H21 de CLSI para obtener instrucciones adicionales sobre la obtención y el almacenaje de muestras.

PROCEDIMIENTO

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES

1. No pipetear ningún producto con la boca. No fumar, comer ni beber en las áreas destinadas a la manipulación de los especímenes y reactivos.

2. Utilizar guantes desechables y manipular con cuidado todos los especímenes sanguíneos, como si fueran capaces de transmitir agentes infecciosos. Consultar inmediatamente con un médico, en caso de ingestión de especímenes, o que éstos entren en contacto con laceraciones abiertas, lesiones, membranas mucosas u otras heridas cutáneas.

3. Limpiar inmediatamente con una solución de hipoclorito sódico al 5%, en una dilución de

1/10, cualquier derrame de especímenes. Desechar todo el material de limpieza mediante un sistema de desecho adecuado.

4. Desechar todos los especímenes como si contuvieran agentes infecciosos. Tratamiento de productos sanguíneos previo al desecho:

a. Esterilizar durante 60 minutos a 121°C.

b. Incinerar los materiales desechables.

c. Mezclar el líquido a desechar con una solución de hipoclorito sódico al 5%, obteniendo una concentración final de aproximadamente el 0,5% de hipoclorito sódico. Dejar reposar la mezcla 30 minutos antes de desecharla.

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA

1. Calentar previamente a 37°C un volumen suficiente de Reactivo TriniCLOT aPTT S y CaCl2 TriniCLOT aPTT S.

2. Etiquetar un tubo de ensayo para cada muestra (paciente y control) a analizar.

3. Pipetear 0,1 ml de muestra o control al tubo adecuado; a continuación, pipetear 0,1 ml de Reactivo TriniCLOT aPTT S a cada tubo.

4. Después de la activación, pipetear inmediatemente a cada tubo 0,1 ml de CaCl2 TriniCLOT aPTT S previamente calentado e iniciar simultáneamente el cronometraje para la detección de la coagulación mediante un método de detección conveniente. Anotar el tiempo, en segundos, transcurrido hasta que se detecta coagulación.

NOTAS Y PRECAUCIONES DE PROCEDIMIENTO

1. A fin de obtener una ejecucion deseada del reactivo, debe utilizarse CaCl2 TriniCLOT aPTT S en combinación con Reactivo TriniCLOT aPTT S. No sustiuir el CaCl2

TriniCLOT aPTT S por otros reactivos de cloruro de calcio. Los reactivos corresponden específicamente con el lote de equipo para asegurar una ejecución óptima. No mezclar los reactivos de diferentes lotes de equipo.

2. Se recomienda efectuar las determinaciones por duplicado para los métodos manuales.12

3. Es importante utilizar material de vidrio (o de plástico) limpio. La superficie del contenedor y el área superficial pueden alterar la activación de las muestras. Se recomienda seguir una misma técnica en todos los procedimientos de coagulación.

4. La siguiente secuencia es adecuada para realizar una prueba de tiempo de tromboplastina parcial activada; para las determinaciones automáticas, seguir las instrucciones específicas que acompañan al instrumento utilizado.

CONTROL DE CALIDAD

1. Se recomienda utilizar plasmas de control (TriniCHECK Level 1, 2, 3 o TriniCHECK Control 1, 2, 3) para controlar las pruebas de coagulación según los procedimientos del control de calidad establecidos para laboratorios. El CLSI recomienda ensayar los controles con cada grupo de ensayos, con cada turno de personal y con cada 40 muestras por lo menos.

2. Si los valores del control no se encuentran dentro del margen normal, no proceder con las muestras del paciente. Determinar qué parte del instrumento/reactivo/sistema de control no funciona correctamente y corregirla. Después de llevar a cabo las medidas correctivas, siguiendo las buenas prácticas de laboratorio, volver a analizar los controles. Si se encuentran dentro del margen, proceder con las muestras del paciente y anotarlas.

RESULTADOS

El tiempo obtenido (en segundos) es el Tiempo de Tromboplastina Parcial Activado del paciente.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Aunque con TriniCLOT aPTT S pueden utilizarse casi todos los métodos manuales y automáticos para la detección de la coagulación, los diversos métodos pueden detectar puntos finales ligeramente distintos. Deben tomarse las oportunas precauciones al comparar resultados obtenidos con métodos distintos.

El plasma con alto contenido en fibrinógeno de algunos pacientes muestra un aumento de turbiedad tras añadirle cloruro de calcio, lo que puede originar, ya antes de la formación real de coágulo, un registro del tiempo de coagulación al usarse un sistema óptico de detección. No obstante, el tiempo real de coagulación no queda afectado por ello, lo cual permite la obtención de un TTPA terapéuticamente apropiado usando un método no óptico. Los plasmas cuyo resultado a punto final de TTPA óptica sea inferior a 22 segundos, de valores ampliamente discrepantes o incongruentes con el curso de la terapia del paciente, deberán ser identificados y controlados nuevamente con un sistema de detección a punto final no óptico.

RESULTADOS ESPERADOS

Además de la población de pacientes, los tiempos de coagulación dependen de numerosos factores, incluyendo la temperatura, la calidad del agua, el pH, la fuerza iónica, el método utilizado, la recolección y la conservación de especímenes. Los datos de TTPA se obtuvieron con 25 adultos normales, utilizando instrumentos fotópticos a fin de establecer un intervalo de referencia. Según estos resultados, el intervalo de referencia (95 por ciento) se determinó entre 25-34 segundos. Esto es sólo una guía para el usuario; cada laboratorio debería establecer sus intervalos de referencia normales11 específicos y terapéuticos.Page 2 of 2 - ES

CARACTERÍSTICAS DEL ENSAYO

En estudios representativos con Coag-A-Mate® X2 y TriniCLOT aPTT S se analizaron los siguientes plasmas: pool de un plasma normal, pool de un plasma anormal, TriniCHECK Level 1, 2, 3. En el estudio interensayo, el coeficiente de variación (CV) fue inferior al 1,5% para cada plasma. Cada laboratorio debería establecer sus propios márgenes de control de calidad según la precisión del método de detección del punto final empleado y las condiciones de prueba del laboratorio.

En estudios adicionales, TriniCLOT aPTT S mostró una correlación excelente con el TriniCLOT Automated aPTT con una coeficiente de correlación de 0,945, una pendiente de 1,03 y un punto de corte del eje de las y de –0,063. Para asistencia técnica, tomar contacto con el servicio técnico local de Tcoag.

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