PRUEBA DE VIH

USO

La prueba de VIH  es un ensayo individual para la detección de anticuerpos para el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y 2 en suero, plasma o sangre total.

RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA

El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) se ha reconocido como el agente etiológico del Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). El VIH se ha aislado de:

a)       Numerosos pacientes con SIDA y desordenes relacionados.

b)       Miembros asintomáticos de grupos de alto riesgo de SIDA.

c)       Pacientes sin otros factores de alto riesgo quienes han contraído SIDA después de recibir transfusiones sanguíneas.

La mayoría de los pacientes con SIDA o Complejos Relacionados con SIDA (ARC) tienen anticuerpos para las proteínas estructurales del virus de VIH. Es más una proporción de miembros de grupos de alto riesgo clínicamente saludables como los homosexuales, hemofílicos o adictos a las drogas son también seropositivos. La infección por VIH se diagnostica mediante la detección de anticuerpos específicos para el virus. Actualmente se conocen dos tipos de VIH, VIH-1 y VIH-2 con 40-60% de aminoácidos homólogos entre las dos cepas.

La prueba de  VIH es un inmunoensayo rápido basado en el principio del sandwich inmunocromatográfico.

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO

Las proteínas recombinantes representando las regiones de las proteínas de la cubierta del VIH-1 Y VIH-2, la glicoproteína gp41, gp120 (VIH-1), y la glicoproteína gp36 (VIH-2) respectivamente so inmovilizadas en la región de la prueba de la tira de nitrocelulosa. Estas proteínas también se unen al aro coloidal  y se impregnan por debajo de la región de prueba del  cartucho. Una banda delgada de la  membrana de nitrocelulosa también se sensibiliza como una región control.

Durante la prueba se aplican dos gotas de suero, plasma o sangra total al área de muestra, seguido de dos gotas de buffer de lavado y se deja que reaccionen. Loas anticuerpos IgG, específicos para las proteínas recombinantes del VIH-1 y VIH-2, reaccionaran con los antígenos unidos a las partículas de oro coloidal. El complejo partículas de oro coloidal-anticuerpos se mueve cromatográficamente a través de la membrana a las regiones de prueba y control de cartucho de prueba.

Una reacción positiva se visualiza por una banda de color rosa/púrpura en la región de prueba del cartucho.

Una reacción negativa ocurre en la ausencia de anticuerpos inmunoglobulina humanos para VIH en la muestra analizada. Consecuentemente se desarrolla una banda no detectable visualmente en la región de prueba del cartucho.

Un exceso de conjugado forma una segunda banda rosa/roja en la región control del cartucho. La aparición de esta banda indica el adecuado funcionamiento de los reactivos del equipo.

MATERIAL Y REACTIVOS

1.      Cartuchos de Prueba

Cada cartucho de prueba contiene oro coloidal marcado con proteínas VIH recombinantes, proteínas VIH recombinantes como zona de prueba y una línea de control.

2.      Reactivo de Lavado

Reactivo individual para sangre total, suero o plasma.

3.      Pipetas desechables

4.      Inserto

5.      Cronómetro

6.      Equipo de Toma de muestra de sangre (ejem.: lancetas, tunos capilares/tubos de prueba).

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

-    El equipo de prueba de VIH y la solución de lavado se puede almacenar de 275-300K (2-27°C).

-    Los componentes del equipo no se deben de utilizar después de su fecha de caducidad.

-    No fume, beba  o coma en áreas en las cueles se estén manipulando las muestras.

-    Deseche todas las muestras, pipetas y cartuchos utilizados ya que son capaces de transmitir infección. Los métodos de desecho de preferencia son esterilizando en autoclave a 121°C por un mínimo de 60min. O por incineración.

-    Cuando se elimine el buffer de lavado evite su contacto con algún ácido.

-    Todos los derrames se deben de limpiar completamente utilizando un desinfectante adecuado como el hipoclorito de sodio.

-    Utilice una pipeta desechable y un cartucho por cada muestra probada.

-    Los controles proporcionados se han certificado libres de virus. Como con todos los ensayos de screening cualquier resultado se debe de considerar presuntivo hasta que se haya realizado un ensayo confirmatorio de acuerdo a las prácticas locales o guías de la OMS.

RECOLECCIÓN Y ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA

Se puede utilizar sangre total, suero o plasma.

·         Sangre Total: Si se usa una lanceta para punción capilar, las gotas de sangre se deben de tomar de la punta del dedo utilizada la pipeta proporcionada en el equipo y a partir de esta pipeta colocar las gotas en el cartucho. Las gotas de sangre no se deben colocar directamente de la punta del dedo al cartucho ya que su volumen puede variar.

NOTA IMPORTANTE: Las muestras de sangre total (MUESTRAS FRESCAS) se deben usar dentro de los diez minutos después de su toma para un funcionamiento óptimo del cartucho.

-      Si la muestra se ha comenzado a coagular no vuelva a mezclar antes de realizar la prueba. En tales casos, se debe de pipetear el suero claro del coágulo y utilizarlo para el análisis.

-      Si se ha utilizado una muestra de sangre con anticoagulante, la sangre total se puede colocar directamente en los cartuchos usando la pipeta proporcionada. Si la prueba no se va a llevar a cabo inmediatamente, las muestras se deben de almacenar de 275-281k (2-8°C) máximo tres días o preferentemente las muestras se deben de centrifugar y conservar el plasma para pruebas futuras.

·         Suero o Plasma: El suero o plasma se puede mantener de 275-281k (2-8°C) por tres días. Las muestras se deben de congelar para el caso de almacenamientos más prolongados (no más de cinco días). Evite repetir el congelamiento-descongelamiento de las muestras.

NOTA IMPORTANTE: De preferencia utilice muestras frescas para realizar la prueba.

CONTROL DE CALIDAD

Las Buenas Prácticas de Laboratorio requieren el uso de muestras control para asegurar un funcionamiento adecuado del cartucho por lo menos una vez al día.

El procedimiento de control de calidad en el cartucho de prueba indica que la prueba esta funcionando correctamente. Una line rosa/roja siempre debe de aparecer en la ventana control.

PROCEDIMIENTO

1)      Si cualquier muestra/reactivo se ha almacenado en refrigeración, permita que se atemperen 20min. A temperatura ambiente.

2)      Marque la prueba con la información apropiada del paciente.

3)      Utilizando una de las pipetas proporcionadas tome la muestra (suero/plasma/sangre total).

4)      Colocando la pipeta sobre el área de muestra adicione dos gotas de muestra (aproximadamente 60 ЧL) cuidadosamente.

5)      Adicione dos gotas (aproximada- mente 60 ЧL) del reactivo de lavado al área de la muestra.

6)      Permita que transcurran exactamente 10min. Para que la reacción ocurra. El resultado se debe de leer exactamente al final de los 10min. Del tiempo de incubación. Los resultados son estables aproximadamente durante 5-10min.

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS DE PRUEBA

·         Positivo: Una línea de cualquier intensidad en el área de prueba, una segunda línea en el área de control indica un resultado positivo.

·         Negativo: Una línea en el área de control únicamente indica un resultado negativo.

·         Invalido: Ausencia de una línea en el área de control. La prueba se debe de repetir con un cartucho nuevo independientemente de que aparezca un alinea en el área de prueba.

RESULTADOS

ü  Puesto a que se observa una línea de color rasa/roja; tanto en la región de prueba como en la región de control en el cartucho, mi resultado es…

POSITIVO

LIMITACIONES

-      El procedimiento de prueba de VIH y la interpretación de los resultados se deben de seguir al pie de la letra para la detección de anticuerpos VIH en suero, plasma o sangre total.

-      La  prueba de VIH esta hecha para probar únicamente muestras sin diluir. Las muestras no se deben de diluir antes de realizar la prueba.

-      Los individuos inmunosuprimidos o inmunocomprometidos infectados con VIH-1 o VIH-2 pueden no producir anticuerpos para el virus. Probar con cualquier equipo diseñado para detectar anticuerpos puede dar resultados negativos y podrían no ser un método de prueba adecuado para teles pacientes.

-      Los niños pueden recibir anticuerpos de la madre infectada o puede ser que no produzcan anticuerpos en respuesta a una infección. Por lo tanto es necesario tener un cuidado extremo en la interpretación de sus resultados.

-      El SIDA y el ARC son síndromes clínicos y sus diagnósticos pueden establecerse clínicamente. Los resultados de  la  prueba de VIH por si solos no se pueden utilizar para diagnosticar SIDA. Un resultado negativo no excluye de la posibilidad de exposición al VIH o infección con VIH.

Prueba de Rumpel-Leede

Prueba de Rumpel-Leede

Introducción:

Consiste en someter el antebrazo del paciente a una presión intermedia entre la sistólica y la diastólica durante 5 minutos. Tras la retirada del manguito inflable del tensiómetro, como para medir la T.A.  y esperar a que la piel recupere su estado relajado se observa la zona presionada. El conteo de petequias producidas por la rotura capilar en un área de unos 10 cm² superior a 30 da positivo en el signo de Rumpel-Leede.

Normalmente no debe de producirse mas de 5 petequias por debajo de la comprensión, más de 10 petequias y sobre todo extendidas mas alla del cuarto superior del antebrazo es patológico.   

Tiene como finalidad determinar la fragilidad de las paredes capilares, estimar la tendencia a la hemorragia y ayuda a reconocer la trombocitopenia.

Valores Normales:

0-10 = 1+

10-20 = 2+

20-50 = 3+

50 o más petequias = 4+

Los valores aumentados pueden indicar coagulación intravascular difusa. disminución del fibrinogeno, disminución de la protombina, deficiencia del factor VII, trombocitopenia, tromboastenia, deficiencia de vitamina K. Y puede estar asociado a afecciones no relacionados con trastornos de coagulación como: escarlatina, hipertensión, diabetes, gripe, sarampión, escorbuto.

Observaciónes:

Resulta ser una prueba muy facil y confiable, pero se debe de tener el clara la información de que es una "petequia" para que se pueda brindar un resultado confiable.

Retracción del coagulo

RETRACCIÓN DEL COAGULO

Objetivo: Al término de la practica el alumno será capaz de realizar e interpretar la prueba de R.C.

Introducción: Puesto que el coagulo de fibrina encierra los elementos organizados (celulares) de la sangre (in vitro e in vitro) el volumen de glóbulos rojos establece el límite inferior de la retracción de la fibrina. Por lo tanto, siendo normales los demás factores, el coágulo se retrae tanto mas cuanto menor es el hematocrito. La retracción es directamente proporcional al número de plaquetas, e inversamente al hematocrito. Cuando las fibrinolinas son muy activas, la fibrina puede disolverse casi tan rapidamente como se forma, y la retracción del coágulo se modifica en los trastornos de este tipo: choque, quemaduras, etc.

Mide la cantidad de fibrina formada y su retracción; así como al número de función de las plaquetas pues poseen una proteína similar a la actomiosina, que produce la retracción del coágulo,

Material:

*Tubos de ensaye para centrifuga.

*Alambre de 1 mm. de grosor

*Baño Maria de 37°C

*Equipo de Venopunción

Técnica:

1.- Se pone en un tubo de centrifuga graduado de 5ml. De Sangre venosa recien obtenida. Se lleva el alambre al fondo del tubo.

2.- Se pone el tubo en el alambre, de un baño a 37°C en donde se deja 1 hora después de la formación del coágulo sin tocarlo.

3.- Se saca el alambre cuidadosamente y se deja escurrir dentro del tubo el coágulo unido al almbre durante 1-2 minutos.

4.- Se lee el volumen del liquido que quedo en el tubo. El resultado se espresa como un porcentaje inicial de 5ml.

Ejemplo: Si después de la coagulación de 5 ml. de sangre suministraron 3 ml de líquido .

 La retracción es de : 3x100/5 = 60 por ciento (%)

Valores normales:

entre 48 y 64 por ciento.

Resultados:

1er muestra: 50 por ciento

2da muestra; 70 por ciento

Observaciones: Esta prueba resulta ser muy practica y confiable, aunque suele ser un poco tardada por el tiempo que se deja en baño maria.

Tiempo de sangrado

                         TIEMPO DE SANGRADO

OBJETIVO
Que al término de la práctica realice el  tiempo de sangrado por cualquiera de los dos métodos existentes.

INTRODUCCIÓN
Un tiempo de sangrado normal indica una retracción normal de los capilares, y la existencia de un número suficiente de plaquetas, con actividad normal.

La metamorfosis viscosa normal depende de un buen mecanismo extrinseco de producción de Tromboplastina, por lo tanto, el tiempo de sangrado se alarga en la insuficiencia del factor VII. El tiempo de sangrado aumenta en forma característica en la púrpura trombocitopénica.

METODOLOGÍA
Se utilizará el "Método de Duke".

MATERIAL
*Lanceta estéril.
*Torundas alcoholadas-
*Reloj cronómetro.
*Papel filtro.

TÉCNICA
1.-Con una lanceta estéril, se practica en el borde inferior del lóbulo de la oreja, una punción de 3 mm. de profundidad. Se pone en marcha el cronómetro.

El borde debe ser bastante profundo, y no debe de abarcar venas visibles.

2.- A intervalos de medio minuto, se aplica cuidadosamente sobre la gota de sangre el borde de un pequeño disco de papel filtro, cuidando de no tocar la piel, Esta maniobra por objeto es impedir que se forme un coágulo en la gota de sangre sobre la herida, pues los tiempos de sangrado resultarán anormalmente bajos.

3.- Utilizando una nueva zona de papel filtro para cada secado de medio minuto, puede tenerse un registro conveniente del tiempo total (tiempo en minutos = número de gotas divididas entre dos). Se toma como punto final al momento en el cual el papel filtro ya no absorbe sangre.

TIEMPO DE SANGRADO NORMAL CON EL MÉTODO DE DUKE
De uno a tres minutos (sin embargo, puede ser a veces hasta cinco minutos en sujetos normales).

MÉTODO DE IVY

TÉCNICA
1.- Se coloca alrededor del brazo un manguito de esfindonometro con el cual se ejerce una presion de 40 mm. de Hg. Que debe permanecer aquel durante toda la prueba.

2.- Utilizando una lanceta esteril se hace a intervalos cortos tres punciones (entre 2.5 y 3.0 mm. de profundidad), a lo largo de la cara flexora (interna) el antebrazo, evitando las venas visibles. Se pone en marcha el cronometro.

3.- A intervalo de medio minuto, utilizando papel filtro se seca cuidadosamente cada gota de sangre en la misma forma que para el método de DUKE, el punto final es el mismo.

TIEMPO NORMAL DE SANGRADO EN EL MÉTODO DE IVY
Entre 2 y 6 minutos (máximo 7).


NOTA: El tiempo de sangrado  representa, sencilla y útil (aunque algo imprecisa) de la eficacia de las funciones capilares y de plaquetas en la hemostasia. Es preferible el método de IVY al de DUKE, pues las condiciones son mas constantes y se realizan en realidad tres pruebas.


RESULTADOS:
*Método de DUKE: 1:30 minutos.
*Método de IVY:     4:30 minutos.

CONCLUSIÓN:

Como ya se menciono anteriormente esta practica resulta ser sencilla y útil, aunque se tiene cono desventaja que es algo imprecisa, es más recomendable el método de IVY, con esto se pudo detectar que nuestros pacientes tienen resultados normales, aunque se recomienda volver a realizar esta practica.